| CRP2是近年來才新發現的基因,它主要表現在血管壁的平滑肌細胞上。由於血管壁平滑肌細胞在心血管疾病及腦血管疾病的致病機轉上扮演重要的角色,探索CRP2的作用及其基因表現的調控機制也非常重要。我們將CRP2promoter及第一內子內的相關調控序列cloning入一擁有luciferasereporter基因的pGL2B質體內,同時製備數種具有平滑肌細胞內常見的轉錄因子基因的表現質體(expressionplasmid),藉由對CV1細胞進行co-transfection,使CRP2的相關調控序列及特定轉錄因子同時表現在CV1細胞內。利用luciferase活性的測定及校正代表CRP2的相關調控序列的活性,進而一步探討其與特定轉錄因子的相互關係。實驗結果顯示,MRTFA對CRP2(+40~-1693)序列有明顯的活化作用,但對CRP2(+40~-1590)的活化作用較不明確；而MRTFB對各種長度CRP2promoterdeletion–luciferaseconstruct並無活化作用,這代表CRP2(+40~-4855)序列間沒有MRTFB的作用點。DNMRTFA630或723都可對CRP2(+40~-795)序列產生一doseresponsive的抑制作用,而暗示MRTFA對此一區間也有作用。最後,實驗證實MRTFA可藉由與CRP2第一內子內第二個CArGBox的相互作用來活化基因的表現。 |